Rt-QPCR EasyTM (ένα βήμα) - Taqman το Cat.No.RT - 02131/02132 One-Step πραγματικός - κύριο μίγμα χρονικού rt-pcr

Το Cat.No.RT - 02131/02132

One-step πραγματικός - κύριο μίγμα χρονικού rt-pcr

Rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα)

Το Cat.No.RT - 02011/02012

One-step κύριο μίγμα rt-pcr

Για την ερευνητική χρήση μόνο

Κατάστημα σε -20℃

Εισαγωγή προϊόντων

Τα One-Step προϊόντα σειράς rt-pcr EasyTM Foregene πραγματοποιούν την ενσωματωμένη αντίδραση από το RNA στο double-stranded DNA, δηλ., αντίστροφη μεταγραφή και PCR η ενίσχυση ολοκληρώνεται στον ίδιο σωλήνα φυγοκεντρωτών αντίδρασης και το ίδιο σύστημα αντίδρασης, που απλοποιεί τα πειραματικά βήματα, βελτιστοποιεί το πειραματικό πρόγραμμα, και βελτιώνει την αποδοτικότητα πειράματος.

Το RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - Taqman που χρησιμοποιεί την πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq, το βελτιστοποιημένο σύστημα Taqman qPCR μπορεί γρήγορα και συγκεκριμένα να εκτελέσει πραγματικό - χρονική RT -RT-qPCR ποσοτική ανίχνευση των προτύπων RNA ιχνών.

Χαρακτηριστικά γνωρίσματα

- Η One-step εξάρτηση επιτρέπει στην αντίστροφα μεταγραφή και PCR για να πραγματοποιηθεί στον ίδιο σωλήνα, να πρέπει μόνο να προσθέσει το RNA προτύπων, τους συγκεκριμένους PCR εγχυτήρες και RNase-ελεύθερο ddH2O.

- Η σε πραγματικό χρόνο ποσοτική ανάλυση του προερχόμενου από ιό RNA ή του RNA ιχνών μπορεί να πραγματοποιηθεί γρήγορα και ακριβώς.

- Η εξάρτηση χρησιμοποιεί ένα μοναδικό αντιδραστήριο μεταγραφής Foregene αντίστροφο και την πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq που συνδυάζονται με ένα μοναδικό σύστημα αντίδρασης για να βελτιώσει αποτελεσματικά την αποδοτικότητα ενίσχυσης και την ιδιομορφία της αντίδρασης.

- Το βελτιστοποιημένο σύστημα αντίδρασης κάνει την αντίδραση να έχει την υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης, την ισχυρότερη θερμική σταθερότητα, και την καλύτερη ανοχή.

- Το RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - εξάρτηση Taqman έρχεται με την εσωτερική χρωστική ουσία αναφοράς ROX, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να εξαλείψει το υπόβαθρο σημάτων και τα λάθη σημάτων μεταξύ των φρεατίων, το οποίο είναι κατάλληλο για το τέλος - χρήστες για να χρησιμοποιήσει στα διαφορετικά πρότυπα των ποσοτικών PCR οργάνων

Ο έλεγχος της ποιότητας των προϊόντων

Σύμφωνα με το συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGEN (συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGENE), κάθε batch του rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα) εξαρτήσεις είναι αυστηρά δοκιμασμένοι πολλαπλάσιοι χρόνοι να εξασφαλιστεί η ποιότητα, η αξιοπιστία και η σταθερότητα κάθε batch εξαρτήσεων.

Περιεχόμενο εξαρτήσεων

Όροι μεταφορών και αποθήκευσης

1.Transportation όροι

Ολόκληρη η διαδικασία της χαμηλής θερμοκρασίας μεταφοράς παγοκιβωτίων, ώστε να εξασφαλιστεί ότι η εξάρτηση είναι σε ένα κράτος <4>

2. Όροι αποθήκευσης

RT EasyTM Ι αποθηκεύεται στο κατάστημα -20°C. το προϊόν σε ένα σταθερό ψυγείο θερμοκρασίας σε -20°C αμέσως μετά από την παραλαβή. Εάν οι όροι αποθήκευσης είναι κατάλληλοι, το προϊόν δεν θα υποβιβάσει οποιαδήποτε απόδοση κατά τη διάρκεια της ενός έτους περιόδου ισχύος.

Πληροφορίες τμημάτων εξαρτήσεων

2× μίγμα rt-pcr EasyTM: Foregene αντίστροφο Transcriptase, RNase ανασταλτικός παράγοντας, πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, απομονωτής αντίδρασης, optimizer και σταθεροποιητής, κ.λπ.

Προφυλάξεις: (Παρακαλώ διαβασμένος τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

Για τα πρότυπα, συστήνεται να χρησιμοποιηθεί το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα ή που αποθηκεύεται σε -80℃ (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, η λειτουργία πειράματος πρέπει να διενεργηθεί στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες φυγοκεντρωτών χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και τα μίας χρήσης γάντια και οι μάσκες πρέπει να φορεθούν. Πριν τη χρήση, βάλτε το μίγμα 2×rt-pcr EasyTM στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και την ιδιομορφία PCR της ενίσχυσης.

Συγκέντρωση RNA προτύπων

Rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα): (συνολικό RNA 0.1pg-1μg)/σύστημα 20μl

Εφαρμογή εξαρτήσεων

- Αυτή η εξάρτηση χρησιμοποιείται για τη γρήγορη ανίχνευση των γονιδίων υψηλός-αντιγράφων και χαμηλός-αντιγράφων.

- Είναι ιδιαίτερα κατάλληλο για τη γρήγορη ανίχνευση των προτύπων RNA με την υψηλή ικανοποιημένη ή σύνθετη δευτεροβάθμια δομή ΑΕΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ.

Ο έλεγχος της ποιότητας των προϊόντων

Σύμφωνα με το συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGEN (συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGENE), κάθε batch του rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα) εξαρτήσεις είναι αυστηρά δοκιμασμένοι πολλαπλάσιοι χρόνοι να εξασφαλιστεί η ποιότητα, η αξιοπιστία και η σταθερότητα κάθε batch εξαρτήσεων.

Οδηγός λειτουργίας

Α: Προετοιμασία των υλικών και των αντιδραστηρίων

1. Προετοιμάστε το έτοιμο πρότυπο RNA (συστήνεται να χρησιμοποιηθούν οι συνολικές εξαρτήσεις σειράς εξαρτήσεων απομόνωσης RNA Foregene για να εξαγάγει και να καθαρίσει το RNA), τους συγκεκριμένους εγχυτήρες (10μM) και τα σχετικά αναλώσιμα και τα όργανα.

Σημείωση: Παρακαλώ εξασφαλίστε την ακεραιότητα του RNA και προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα.

2. Μίγμα rt-pcr EasyTM θέσεων 2× και RNase-ελεύθερο ddH2O σε ένα λουτρό πάγου για να το αφήσει να λειώσει φυσικά, και να τινάσει τον τοίχο σωλήνων που αναμιγνύει καλά για μελλοντική χρήση.

Β: Rt-pcr προετοιμασία συστημάτων

Το μίγμα 2×rt-pcr EasyTM είναι κατάλληλο και γρήγορο να χρησιμοποιήσει, αποφεύγοντας τη ρύπανση κατά τη λειτουργία και τα πειραματικά λάθη που προκαλούνται από τις πολλαπλάσιες προετοιμασίες του συστήματος αντίδρασης στο μέγιστο βαθμό. Κατά χρησιμοποίηση, μόνο τη μισός ο όγκος του συστήματος αντίδρασης (παραδείγματος χάριν, εάν το σύστημα αντίδρασης είναι 20μl, πάρτε τη λύση μιγμάτων 2×rt-pcr EasyTM 10μl), προσθέτει το κατάλληλο ποσό προτύπου RNA και συγκεκριμένων εγχυτήρων, και προσθέτει RNase-ελεύθερο ddH2O για να αποτελέσει τον όγκο. Αναφερθείτε στον πίνακα 1 κατωτέρω για τη συγκεκριμένη προετοιμασία συστημάτων αντίδρασης rt-pcr.

Μορφή 1: Rt-pcr προετοιμασία συστημάτων

1*: Συνήθως η τελική συγκέντρωση του εγχυτήρα είναι 0.20.25μM για να πάρει τα καλύτερα αποτελέσματα. Όταν η απόδοση αντίδρασης είναι κακή, η συγκέντρωση εγχυτήρων μπορεί να ρυθμιστεί μέσα στη σειρά 0.10.5μM.

Σημείωση: Ο μπροστινός εγχυτήρας και ο αντίστροφος εγχυτήρας είναι οι συγκεκριμένοι εγχυτήρες για το γονίδιο στόχων 50μl το σύστημα, παρακαλώ αναφέρεται στο σύστημα 20μl για να ρυθμίσει τη δόση αντιδραστηρίων αναλογικά.

Γ: Rt-pcr ρύθμιση προγράμματος αντίδρασης

• Μετά από να προετοιμάσει το σύστημα rt-pcr σε σχέση με τον ανωτέρω πίνακα, μίγμα ήπια (μπορείτε να χρησιμοποιήσετε την άκρη σιφωνίων για να φυσήξετε ήπια μπορείτε επίσης να αναμίξετε σε ένα vortexer και να υποβάλετε σε φυγοκέντρωση εν συντομία για να συλλέξετε το υγρό που διασκορπίζεται στον τοίχο ή το σωλήνα ΚΑΠ σωλήνων, και να τοποθετήσετε στο παγοκιβώτιο για μελλοντική χρήση).

2. Αναφερθείτε στις τοποθετήσεις προγράμματος αντίδρασης rt-pcr (πίνακας 2) για να θέσετε τη θερμοκρασία και το χρόνο της αντίδρασης.

Σημείωση: Προκειμένου να εξασφαλιστεί η δραστηριότητα του μίγματος 2×rt-pcr EasyTM και να βελτιωθεί η αποδοτικότητα ενίσχυσής του, είναι καλύτερο να προετοιμαστεί το σύστημα αντίδρασης rt-pcr μετά από το PCR πρόγραμμα οργάνων, έτσι ώστε το πρόγραμμα αντίδρασης μπορεί να εισαχθεί αμέσως αφότου προετοιμάζεται το σύστημα.

Μορφή 2: Rt-pcr ρύθμιση συστημάτων αντίδρασης

Σημείωση: Η ανωτέρω διαδικασία είναι για την αναφορά μόνο. Οι πραγματικές συνθήκες αντίδρασης ποικίλλουν ανάλογα με τους δομικούς όρους του προτύπου, των εγχυτήρων, κ.λπ. Για τα πρότυπα RNA με τις σύνθετες δευτεροβάθμιες δομές, η θερμοκρασία αντίδρασης για το πρώτο βήμα της αντίστροφης μεταγραφής συστήνεται για να είναι 50°C. Στη συγκεκριμένη λειτουργία, είναι απαραίτητο να σχεδιαστούν οι βέλτιστοι όροι αντίδρασης, συμπεριλαμβανομένης της ανοπτώντας θερμοκρασίας, του χρόνου επέκτασης, κ.λπ. σύμφωνα με τους συγκεκριμένους όρους του μεγέθους τεμαχίων στόχων, η ακολουθία βάσεων του ενισχυμένου τεμαχίου, και του περιεχομένου ΑΈΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ και του μήκους του εγχυτήρα.
Rt-pcr διάγραμμα λειτουργίας

Foregene αντίστροφο Transcriptase

Το αντίστροφο transcriptase Foregene μπορεί να παρέχει την ιδιαίτερα αποδοτική και συγκεκριμένη αντίστροφη αντίδραση μεταγραφής. Το αντίστροφο transcriptase εκθέτει την υψηλή συγγένεια και διατηρεί ακόμα την καλή αντίστροφη δραστηριότητα μεταγραφής σε μια θερμοκρασία αντίδρασης 50°C. Μπορεί καλά να αντιστρέψει μεταγράφει το RNA με τη σύνθετη δευτεροβάθμια δομή που άλλα αντίστροφα transcriptases δεν μπορούν να χειριστούν. Το Foregene αντίστροφο Transcriptase έχει την υψηλή ευαισθησία και ισχύει σε ένα ευρύ φάσμα των ποσών RNA (0.1pg≤RNA≤1μg).

Πολυμεράση DNA HotStar Taq Foregene

Παρέχει μια ιδιαίτερα συγκεκριμένη ενίσχυση PCR. Όταν η αντίστροφη μεταγραφή είναι υπό εξέλιξη, η πολυμεράση DNA είναι απολύτως ατελέσφορη και δεν εμποδίζει την αντίστροφη αντίδραση μεταγραφής. Μετά από το PCR πρόγραμμα αντίδρασης, που θερμαίνεται σε 94°C, η πολυμεράση DNA ενεργοποιείται και το αντίστροφο transcriptase αδρανοποιείται. Η διαδικασία καυτός-έναρξης αποβάλλει το σχηματισμό των μη συγκεκριμένοι ανοπτώντας εγχυτήρων και dimers εγχυτήρων στον πρώτο κύκλο, που εξασφαλίζει την υψηλές ιδιομορφία και την αξιοπιστία PCR της ενίσχυσης.

Προσοχή: (Παρακαλώ να διαβάσει τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

- Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφύγουν το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω, διαφορετικά η απόδοση των αντιδραστηρίων θα μειωθεί ή θα γίνει άκυρη.

- Συστήνεται να χρησιμοποιηθεί η φρέσκια εξαγωγή δειγμάτων ή το RNA προτύπων που αποθηκεύεται σε -80℃ (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

- Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, η λειτουργία πειράματος πρέπει να εκτελεσθεί στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και τα μίας χρήσης γάντια και οι μάσκες πρέπει να φορεθούν.

- Αυτή η εξάρτηση πρέπει να χρησιμοποιηθεί με τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για τα πειράματα. Παρακαλώ επιλέξτε τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για το γονίδιο που ενισχύεται σύμφωνα με τις ανάγκες του πειράματος.

- Πριν τη χρήση, βάλτε 2× το μίγμα rt-pcr EasyTM στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και την ιδιομορφία PCR της ενίσχυσης.

- Λουτρό πάγου

Μόνος-προετοιμασμένα αντιδραστήρια

- Πρότυπο RNA

- Συγκεκριμένοι PCR γονιδίων εγχυτήρες

Ασφάλεια

       - Αυτό το προϊόν είναι για τη χρήση επιστημονικής έρευνας μόνο, παρακαλώ μην την χρησιμοποιήστε στην ιατρική, την κλινική ιατρική, τα τρόφιμα και τα καλλυντικά.

       - Κατάλληλα εργαστηριακά το ενδύματα ένδυσης, γάντια, προστατευτικά γυαλιά, κ.λπ. κατά χρησιμοποίηση των χημικών ουσιών.

Ο αρνητικός έλεγχος έχει την πάρα πολύ υψηλή αξία φθορισμού

1. Μόλυνση αντιδραστηρίων προκαλούμενη κατά τη λειτουργία.

Σύσταση: Αντικαταστήστε με τα νέα αντιδραστήρια για τα πειράματα rt-pcr.

2. Η μόλυνση εμφανίστηκε κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας του PCR συστήματος αντίδρασης. Σύσταση: Λάβετε τα απαραίτητα προστατευτικά μέτρα κατά τη λειτουργία, όπως: φορώντας τα γάντια λατέξ, που χρησιμοποιούν μια άκρη σιφωνίων με ένα φίλτρο, κ.λπ.

3. Οι εγχυτήρες υποβιβάζονται, και η υποβάθμιση των εγχυτήρων θα οδηγήσει στη μη συγκεκριμένη ενίσχυση.

Πρόταση: Χρησιμοποιήστε την ηλεκτροφόρηση sds-ΣΕΛΙΔΩΝ για να ανιχνεύσετε εάν οι εγχυτήρες υποβιβάζονται, και τους αντικαταστήστε με τους νέους εγχυτήρες για τα πειράματα rt-pcr.

Φτωχή επανάληψη των ποσοτικών τιμών

1. Το όργανο δυσλειτουργεί.

Πρόταση: Μπορούν να υπάρξουν λάθη μεταξύ κάθε PCR τρύπας της PCR μηχανής, με συνέπεια τη φτωχή δυνατότητα αναπαραγωγής κατά τη διάρκεια της διαχείρισης ή της ανίχνευσης θερμοκρασίας.

Παρακαλώ πραγματοποιήστε τη δοκιμή σύμφωνα με τις οδηγίες του αντίστοιχου οργάνου.

2. Η αγνότητα δειγμάτων δεν είναι καλή.

Σύσταση: Τα Impure δείγματα θα οδηγήσουν στη φτωχή δυνατότητα αναπαραγωγής του πειράματος, το οποίο περιλαμβάνει την αγνότητα του προτύπου και των εγχυτήρων. Είναι καλύτερο το πρότυπο, και οι εγχυτήρες καθαρίζονται καλύτερα από SDS-PAGE.

3. Ο PCR χρόνος προετοιμασιών και αποθήκευσης συστημάτων είναι πάρα πολύ μακροχρόνιος.

Πρόταση: Χρησιμοποιήστε το σύστημα rt-pcr για PCR τα πειράματα αμέσως μετά από την προετοιμασία, και μην το αφήστε για πάρα πολύ καιρό συστήνεται στην οργάνωση το PCR πρόγραμμα πρίν συνεχίζει με την προετοιμασία συστημάτων rt-pcr.

4. Οι PCR όροι ενίσχυσης δεν είναι κατάλληλοι, και η ακολουθία ή η συγκέντρωση εγχυτήρων είναι ανάρμοστη.

Πρόταση: επιβεβαιώστε την ακρίβεια της ακολουθίας εγχυτήρων και ο εγχυτήρας δεν έχει υποβιβαστεί όταν το σήμα ενίσχυσης δεν είναι καλό, προσπαθήστε να ρυθμίσετε την ανοπτώντας θερμοκρασία και να ρυθμίσετε τη συγκέντρωση εγχυτήρων κατάλληλα.