Rt-QPCR EasyTM (ένα βήμα) - Taqman το Cat.No.RT - 02131/02132 με την πολυμεράση DNA Taq

RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - Taqman το Cat.No.RT - 02131/02132 One-step πραγματικός - κύριο μίγμα χρονικού rt-pcr με την πολυμεράση DNA Taq

Rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα)

Το Cat.No.RT - 02011/02012

One-step κύριο μίγμα rt-pcr

Για την ερευνητική χρήση μόνο

Κατάστημα σε -20℃

Εισαγωγή προϊόντων

Τα One-Step προϊόντα σειράς rt-pcr EasyTM Foregene πραγματοποιούν την ενσωματωμένη αντίδραση από το RNA στο double-stranded DNA, δηλ., αντίστροφη μεταγραφή και PCR η ενίσχυση ολοκληρώνεται στον ίδιο σωλήνα φυγοκεντρωτών αντίδρασης και το ίδιο σύστημα αντίδρασης, που απλοποιεί τα πειραματικά βήματα, βελτιστοποιεί το πειραματικό πρόγραμμα, και βελτιώνει την αποδοτικότητα πειράματος.

Το rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα) είναι μια one-step εξάρτηση rt-pcr που αναπτύσσεται ειδικά από Foregene, το οποίο πραγματοποιεί τη συνεχή λειτουργία από RT PCR στον ίδιο σωλήνα. Η λειτουργία είναι απλή και γρήγορη, το οποίο μπορεί αποτελεσματικά να μειώσει τη ρύπανση κατά τη διάρκεια του πειράματος. Το μίγμα 2×rt-pcr EasyTM έχει την ισχυρή ανοχή, τη θερμική σταθερότητα, την υψηλή αποδοτικότητα και την ιδιομορφία για την ενίσχυση.

Χαρακτηριστικά γνωρίσματα

Η one-step εξάρτηση επιτρέπει στην αντίστροφα μεταγραφή και PCR για να πραγματοποιηθεί στον ίδιο σωλήνα. Πρέπει μόνο να προσθέσει το RNA προτύπων, τους συγκεκριμένους PCR εγχυτήρες και RNase-ελεύθερο ddH2O.

Η σε πραγματικό χρόνο ποσοτική ανάλυση του RNA μπορεί να πραγματοποιηθεί γρήγορα και ακριβώς.

Η εξάρτηση χρησιμοποιεί ένα μοναδικό αντιδραστήριο μεταγραφής Foregene αντίστροφο και την πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq που συνδυάζονται με ένα μοναδικό σύστημα αντίδρασης για να βελτιώσει αποτελεσματικά την αποδοτικότητα ενίσχυσης και την ιδιομορφία της αντίδρασης.

Το βελτιστοποιημένο σύστημα αντίδρασης κάνει την αντίδραση να έχει την υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης, την ισχυρότερη θερμική σταθερότητα, και την καλύτερη ανοχή.

Ο έλεγχος της ποιότητας των προϊόντων

Σύμφωνα με το συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGEN (συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGENE), κάθε batch του rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα) εξαρτήσεις είναι αυστηρά δοκιμασμένοι πολλαπλάσιοι χρόνοι να εξασφαλιστεί η ποιότητα, η αξιοπιστία και η σταθερότητα κάθε batch εξαρτήσεων.

Περιεχόμενο εξαρτήσεων

Όροι μεταφορών και αποθήκευσης

1.Transportation όροι

Ολόκληρη η διαδικασία της χαμηλής θερμοκρασίας μεταφοράς παγοκιβωτίων, ώστε να εξασφαλιστεί ότι η εξάρτηση είναι σε ένα κράτος <4>

2. Όροι αποθήκευσης

RT EasyTM Ι αποθηκεύεται στο κατάστημα -20°C. το προϊόν σε ένα σταθερό ψυγείο θερμοκρασίας σε -20°C αμέσως μετά από την παραλαβή. Εάν οι όροι αποθήκευσης είναι κατάλληλοι, το προϊόν δεν θα υποβιβάσει οποιαδήποτε απόδοση κατά τη διάρκεια της ενός έτους περιόδου ισχύος.

Πληροφορίες τμημάτων εξαρτήσεων

2× μίγμα rt-pcr EasyTM: Foregene αντίστροφο Transcriptase, RNase ανασταλτικός παράγοντας, πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq, dNTPs, Mg2+, απομονωτής αντίδρασης, optimizer και σταθεροποιητής, κ.λπ.

Προφυλάξεις: (Παρακαλώ διαβασμένος τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

Για τα πρότυπα, συστήνεται να χρησιμοποιηθεί το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα ή που αποθηκεύεται σε -80℃ (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, η λειτουργία πειράματος πρέπει να διενεργηθεί στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες φυγοκεντρωτών χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και τα μίας χρήσης γάντια και οι μάσκες πρέπει να φορεθούν. Πριν τη χρήση, βάλτε το μίγμα 2×rt-pcr EasyTM στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και την ιδιομορφία PCR της ενίσχυσης.

Συγκέντρωση RNA προτύπων

Rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα): (συνολικό RNA 0.1pg-1μg)/σύστημα 20μl

Εφαρμογή εξαρτήσεων

- Αυτή η εξάρτηση χρησιμοποιείται για τη γρήγορη ανίχνευση των γονιδίων υψηλός-αντιγράφων και χαμηλός-αντιγράφων.

- Είναι ιδιαίτερα κατάλληλο για τη γρήγορη ανίχνευση των προτύπων RNA με την υψηλή ικανοποιημένη ή σύνθετη δευτεροβάθμια δομή ΑΕΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ.

Ο έλεγχος της ποιότητας των προϊόντων

Σύμφωνα με το συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGEN (συνολικό ποιοτικό σύστημα διαχείρισης FOREGENE), κάθε batch του rt-pcr EasyTM Ι (ένα βήμα) εξαρτήσεις είναι αυστηρά δοκιμασμένοι πολλαπλάσιοι χρόνοι να εξασφαλιστεί η ποιότητα, η αξιοπιστία και η σταθερότητα κάθε batch εξαρτήσεων.

Οδηγός λειτουργίας

Α: Προετοιμασία των υλικών και των αντιδραστηρίων

1. Προετοιμάστε το έτοιμο πρότυπο RNA (συστήνεται να χρησιμοποιηθούν οι συνολικές εξαρτήσεις σειράς εξαρτήσεων απομόνωσης RNA Foregene για να εξαγάγει και να καθαρίσει το RNA), τους συγκεκριμένους εγχυτήρες (10μM) και τα σχετικά αναλώσιμα και τα όργανα.

Σημείωση: Παρακαλώ εξασφαλίστε την ακεραιότητα του RNA και προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα.

2. Μίγμα rt-pcr EasyTM θέσεων 2× και RNase-ελεύθερο ddH2O σε ένα λουτρό πάγου για να το αφήσει να λειώσει φυσικά, και να τινάσει τον τοίχο σωλήνων που αναμιγνύει καλά για μελλοντική χρήση.

Β: Rt-pcr προετοιμασία συστημάτων

Το μίγμα 2×rt-pcr EasyTM είναι κατάλληλο και γρήγορο να χρησιμοποιήσει, αποφεύγοντας τη ρύπανση κατά τη λειτουργία και τα πειραματικά λάθη που προκαλούνται από τις πολλαπλάσιες προετοιμασίες του συστήματος αντίδρασης στο μέγιστο βαθμό. Κατά χρησιμοποίηση, μόνο τη μισός ο όγκος του συστήματος αντίδρασης (παραδείγματος χάριν, εάν το σύστημα αντίδρασης είναι 20μl, πάρτε τη λύση μιγμάτων 2×rt-pcr EasyTM 10μl), προσθέτει το κατάλληλο ποσό προτύπου RNA και συγκεκριμένων εγχυτήρων, και προσθέτει RNase-ελεύθερο ddH2O για να αποτελέσει τον όγκο. Αναφερθείτε στον πίνακα 1 κατωτέρω για τη συγκεκριμένη προετοιμασία συστημάτων αντίδρασης rt-pcr.

Μορφή 1: Rt-pcr προετοιμασία συστημάτων

1*: Συνήθως η τελική συγκέντρωση του εγχυτήρα είναι 0.20.25μM για να πάρει τα καλύτερα αποτελέσματα. Όταν η απόδοση αντίδρασης είναι κακή, η συγκέντρωση εγχυτήρων μπορεί να ρυθμιστεί μέσα στη σειρά 0.10.5μM.

Σημείωση: Ο μπροστινός εγχυτήρας και ο αντίστροφος εγχυτήρας είναι οι συγκεκριμένοι εγχυτήρες για το γονίδιο στόχων 50μl το σύστημα, παρακαλώ αναφέρεται στο σύστημα 20μl για να ρυθμίσει τη δόση αντιδραστηρίων αναλογικά.

Γ: Rt-pcr ρύθμιση προγράμματος αντίδρασης

• Μετά από να προετοιμάσει το σύστημα rt-pcr σε σχέση με τον ανωτέρω πίνακα, μίγμα ήπια (μπορείτε να χρησιμοποιήσετε την άκρη σιφωνίων για να φυσήξετε ήπια μπορείτε επίσης να αναμίξετε σε ένα vortexer και να υποβάλετε σε φυγοκέντρωση εν συντομία για να συλλέξετε το υγρό που διασκορπίζεται στον τοίχο ή το σωλήνα ΚΑΠ σωλήνων, και να τοποθετήσετε στο παγοκιβώτιο για μελλοντική χρήση).

2. Αναφερθείτε στις τοποθετήσεις προγράμματος αντίδρασης rt-pcr (πίνακας 2) για να θέσετε τη θερμοκρασία και το χρόνο της αντίδρασης.

Σημείωση: Προκειμένου να εξασφαλιστεί η δραστηριότητα του μίγματος 2×rt-pcr EasyTM και να βελτιωθεί η αποδοτικότητα ενίσχυσής του, είναι καλύτερο να προετοιμαστεί το σύστημα αντίδρασης rt-pcr μετά από το PCR πρόγραμμα οργάνων, έτσι ώστε το πρόγραμμα αντίδρασης μπορεί να εισαχθεί αμέσως αφότου προετοιμάζεται το σύστημα.

Μορφή 2: Rt-pcr ρύθμιση συστημάτων αντίδρασης

Σημείωση: Η ανωτέρω διαδικασία είναι για την αναφορά μόνο. Οι πραγματικές συνθήκες αντίδρασης ποικίλλουν ανάλογα με τους δομικούς όρους του προτύπου, των εγχυτήρων, κ.λπ. Για τα πρότυπα RNA με τις σύνθετες δευτεροβάθμιες δομές, η θερμοκρασία αντίδρασης για το πρώτο βήμα της αντίστροφης μεταγραφής συστήνεται για να είναι 50°C. Στη συγκεκριμένη λειτουργία, είναι απαραίτητο να σχεδιαστούν οι βέλτιστοι όροι αντίδρασης, συμπεριλαμβανομένης της ανοπτώντας θερμοκρασίας, του χρόνου επέκτασης, κ.λπ. σύμφωνα με τους συγκεκριμένους όρους του μεγέθους τεμαχίων στόχων, η ακολουθία βάσεων του ενισχυμένου τεμαχίου, και του περιεχομένου ΑΈΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ και του μήκους του εγχυτήρα.
Rt-pcr διάγραμμα λειτουργίας

Foregene αντίστροφο Transcriptase

Το αντίστροφο transcriptase Foregene μπορεί να παρέχει την ιδιαίτερα αποδοτική και συγκεκριμένη αντίστροφη αντίδραση μεταγραφής. Το αντίστροφο transcriptase εκθέτει την υψηλή συγγένεια και διατηρεί ακόμα την καλή αντίστροφη δραστηριότητα μεταγραφής σε μια θερμοκρασία αντίδρασης 50°C. Μπορεί καλά να αντιστρέψει μεταγράφει το RNA με τη σύνθετη δευτεροβάθμια δομή που άλλα αντίστροφα transcriptases δεν μπορούν να χειριστούν. Το Foregene αντίστροφο Transcriptase έχει την υψηλή ευαισθησία και ισχύει σε ένα ευρύ φάσμα των ποσών RNA (0.1pg≤RNA≤1μg).

Πολυμεράση DNA HotStar Taq Foregene

Παρέχει μια ιδιαίτερα συγκεκριμένη ενίσχυση PCR. Όταν η αντίστροφη μεταγραφή είναι υπό εξέλιξη, η πολυμεράση DNA είναι απολύτως ατελέσφορη και δεν εμποδίζει την αντίστροφη αντίδραση μεταγραφής. Μετά από το PCR πρόγραμμα αντίδρασης, που θερμαίνεται σε 94°C, η πολυμεράση DNA ενεργοποιείται και το αντίστροφο transcriptase αδρανοποιείται. Η διαδικασία καυτός-έναρξης αποβάλλει το σχηματισμό των μη συγκεκριμένοι ανοπτώντας εγχυτήρων και dimers εγχυτήρων στον πρώτο κύκλο, που εξασφαλίζει την υψηλές ιδιομορφία και την αξιοπιστία PCR της ενίσχυσης.

Προσοχή: (Παρακαλώ να διαβάσει τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

- Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφύγουν το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω, διαφορετικά η απόδοση των αντιδραστηρίων θα μειωθεί ή θα γίνει άκυρη.

- Συστήνεται να χρησιμοποιηθεί η φρέσκια εξαγωγή δειγμάτων ή το RNA προτύπων που αποθηκεύεται σε -80℃ (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

- Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, η λειτουργία πειράματος πρέπει να εκτελεσθεί στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και τα μίας χρήσης γάντια και οι μάσκες πρέπει να φορεθούν.

- Αυτή η εξάρτηση πρέπει να χρησιμοποιηθεί με τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για τα πειράματα. Παρακαλώ επιλέξτε τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για το γονίδιο που ενισχύεται σύμφωνα με τις ανάγκες του πειράματος.

- Πριν τη χρήση, βάλτε 2× το μίγμα rt-pcr EasyTM στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και την ιδιομορφία PCR της ενίσχυσης.