Rt-QPCR EasyTM - SYBR πράσινο Ι το Cat.No.RT - 02111/02112 ένα βήμα πραγματικό - χρονικό RT PCR κύριο μίγμα με τη χρωστική ουσία αναφοράς ROX

RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - SYBR πράσινο Ι το Cat.No.RT - 02111/02112 One-step πραγματικός - κύριο μίγμα χρονικού rt-pcr με τη χρωστική ουσία αναφοράς ROX

RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - SYBR πράσινο Ι

Το Cat.No.RT - 02111/02112

One-step πραγματικός - κύριο μίγμα χρονικού rt-pcr

Για την ερευνητική χρήση μόνο

Κατάστημα σε -20℃

Εισαγωγή προϊόντων

RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - SYBR πράσινο Iuses ένα μοναδικό σύστημα για να συνδυάσει αποτελεσματικά RT και πραγματικός - χρονικό PCR αντιδράσεις, οι οποίες μπορούν γρήγορα να ολοκληρώσουν την ποσοτική ανίχνευση των γονιδίων. Το προϊόν έχει την ισχυρή ανοχή, την υψηλές ιδιομορφία και τη σταθερότητα. Το προϊόν περιέχει τη μοναδική πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq της επιχείρησης, η οποία έχει τα πλεονεκτήματα της γρηγορότερης ενίσχυσης (2Kb/min), της υψηλής αποδοτικότητας ενίσχυσης, της ισχυρής συγκεκριμένης δυνατότητας ενίσχυσης, και του χαμηλού ποσοστού κακού συνδυασμού έναντι των συνηθισμένων ενζύμων Taq. Χρησιμοποιείται εδώ για πραγματικό - χρονικό rt-pcr για να μειώσει τη μη συγκεκριμένη ενίσχυση και να βελτιώσει την ακρίβεια PCR.

Χαρακτηριστικά γνωρίσματα

Η One-step εξάρτηση κάνει την αντίστροφη μεταγραφή και qPCR δύο αντιδράσεις στον ίδιο σωλήνα, πρέπει μόνο να προσθέσουν το RNA προτύπων, τους συγκεκριμένους PCR εγχυτήρες και RNase-ελεύθερο ddH2O.

Η εξάρτηση μπορεί γρήγορα και αποτελεσματικά ποσοτικά να αναλύσει το προερχόμενο από ιό RNA ή να επισημάνει το RNA.

Η εξάρτηση χρησιμοποιεί ένα μοναδικό αντιδραστήριο μεταγραφής Foregene αντίστροφο και την πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq που συνδυάζονται με ένα μοναδικό σύστημα αντίδρασης για να βελτιώσει αποτελεσματικά την αποδοτικότητα ενίσχυσης και την ιδιομορφία της αντίδρασης.

Το βελτιστοποιημένο σύστημα αντίδρασης κάνει την αντίδραση να έχει την υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης, την ισχυρότερη θερμική σταθερότητα, και την καλύτερη ανοχή.

RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - η πράσινη Ι εξάρτηση SYBR έρχεται με την εσωτερική χρωστική ουσία αναφοράς ROX, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να εξαλείψει το υπόβαθρο σημάτων και τα λάθη σημάτων μεταξύ των φρεατίων, το οποίο είναι κατάλληλο για τους πελάτες να χρησιμοποιήσουν στα διαφορετικά πρότυπα των ποσοτικών PCR οργάνων.

Περιεχόμενο εξαρτήσεων

Όροι μεταφορών και αποθήκευσης

1.Transportation όροι

Ολόκληρη η διαδικασία της χαμηλής θερμοκρασίας μεταφοράς παγοκιβωτίων, ώστε να εξασφαλιστεί ότι η εξάρτηση είναι σε ένα κράτος <4>

2. Όροι αποθήκευσης

• Η εξάρτηση αποθηκεύεται σε -20℃. Αποθηκεύστε το προϊόν σε ένα σταθερό ψυγείο θερμοκρασίας σε -20℃ αμέσως μετά από την παραλαβή. Εάν οι όροι αποθήκευσης είναι κατάλληλοι, το προϊόν δεν θα υποβιβάσει οποιαδήποτε απόδοση κατά τη διάρκεια της ενός έτους περιόδου ισχύος.
• το τμήμα 2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR περιέχει SYBR πράσινο Ι, παρακαλώ το κρατήστε μακρυά από το φως.

Πληροφορίες τμημάτων εξαρτήσεων

2× RT -RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR: Το Foregene αντίστροφο Transcriptase, RNase ανασταλτικός παράγοντας, πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq, βελτιστοποίησε την αναλογία των dNTPs, SYBR GreenI, Mg2+, σταθεροποιητές, ανυψωτές, και optimizers.

Χρωστική ουσία αναφοράς ROX: χρησιμοποιείται γενικά σε πραγματικό - χρονικό PCR ενισχυτές των επιχειρήσεων όπως η ABI και Stratagene για να ρυθμίσει τη διαφορά μεταξύ PCR των σωλήνων και των σωλήνων που προκαλούνται από PCR τα λάθη φόρτωσης δειγμάτων. Η συγκέντρωση της χρωστικής ουσίας αναφοράς ROX που απαιτείται από τα διαφορετικά όργανα είναι διαφορετική, και ο χρήστης μπορεί να την προσθέσει σύμφωνα με τη συνιστώμενη συγκέντρωση του οργάνου.

Προφυλάξεις: (Παρακαλώ διαβασμένος τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφύγουν το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω, διαφορετικά η απόδοση των αντιδραστηρίων θα μειωθεί ή θα γίνει άκυρη.

Τα αντιδραστήρια στην εξάρτηση πρέπει να προστατευθούν από ελαφρύ και να αποθηκευτούν σε -20°C.

Συστήνεται να χρησιμοποιηθεί η φρέσκια εξαγωγή δειγμάτων ή το RNA προτύπων που αποθηκεύεται σε -80°C (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, παρακαλώ εκτελέστε το πείραμα στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και γάντια και μάσκες ένδυσης μίας χρήσης.

Αυτή η εξάρτηση πρέπει να χρησιμοποιηθεί με τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για τα πειράματα. Παρακαλώ επιλέξτε τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για το γονίδιο που ενισχύεται σύμφωνα με τις ανάγκες του πειράματος.

Πριν τη χρήση, βάλτε 2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR Ι στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και να αυξήσει PCR την ενίσχυση η ιδιομορφία.

2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR περιέχει SYBR πράσινο Ι, παρακαλώ αποφύγετε το ισχυρό φως.

Συγκέντρωση RNA προτύπων

RT -RT-qPCR EasyTM (ένα βήμα) - SYBR πράσινο Ι: (συνολικό RNA 0.1pg-100ng)/σύστημα 20μl.

Οδηγός λειτουργίας

Α: Προετοιμασία των υλικών και των αντιδραστηρίων

1. Προετοιμάστε το έτοιμο πρότυπο RNA (συστήνεται να χρησιμοποιηθούν οι συνολικές εξαρτήσεις σειράς εξαρτήσεων απομόνωσης RNA Foregene για να εξαγάγει και να καθαρίσει το RNA), τους συγκεκριμένους εγχυτήρες (10μM) και τα σχετικά αναλώσιμα και τα όργανα.

Σημείωση: Παρακαλώ εξασφαλίστε την ακεραιότητα του RNA και προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα.

2. Τεθειμένο 2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR, RNase-ελεύθερη χρωστική ουσία αναφοράς ddH2O, και 50×ROX (εάν είναι απαραίτητο) στον πάγο για να το αφήσει να λειώσει φυσικά, και να τινάσει τον τοίχο σωλήνων που αναμιγνύει μέχρι τη χρήση.

Β: Προετοιμασία συστημάτων RT -RT-qPCR

2× RT -RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR είναι κατάλληλο και γρήγορο να χρησιμοποιήσει, και αποφεύγει τη ρύπανση κατά τη λειτουργία και τα πειραματικά λάθη που προκαλούνται από τις πολλαπλάσιες προετοιμασίες του συστήματος αντίδρασης στο μέγιστο βαθμό. Κατά χρησιμοποίηση, μόνο τη μισός ο όγκος του συστήματος αντίδρασης (παραδείγματος χάριν, εάν το σύστημα αντίδρασης είναι 20μl, πάρτε τη λύση 10μl 2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR), προσθέτει το πρότυπο RNA και τους συγκεκριμένους εγχυτήρες, και προσθέτει RNase-ελεύθερο ddH2O για να αποτελέσει τον όγκο. Αναφερθείτε στον πίνακα 1 κατωτέρω για τη συγκεκριμένη προετοιμασία συστημάτων αντίδρασης RT -RT-qPCR

Μορφή 1: Προετοιμασία συστημάτων RT -RT-qPCR

1*: Συνήθως η τελική συγκέντρωση του εγχυτήρα είναι 0.20.25μM για να πάρει τα καλύτερα αποτελέσματα. Όταν η απόδοση αντίδρασης είναι κακή, η συγκέντρωση εγχυτήρων μπορεί να ρυθμιστεί μέσα στη σειρά 0.10.5μM.

Σημείωση: Ο μπροστινός εγχυτήρας και ο αντίστροφος εγχυτήρας είναι συγκεκριμένοι εγχυτήρες για το γονίδιο στόχων.

2*: Επιλέξτε την κατάλληλη τελική συγκέντρωση της χρωστικής ουσίας αναφοράς ROX σύμφωνα με τα διαφορετικά ποσοτικά PCR όργανα. Η βέλτιστη συγκέντρωση της χρωστικής ουσίας αναφοράς ROX για τις κοινές ποσοτικές PCR μηχανές παρουσιάζεται στον ακόλουθο πίνακα:

Γ: Ρύθμιση συστημάτων αντίδρασης RT -RT-qPCR

• Μετά από να προετοιμάσει το σύστημα RT -RT-qPCR σε σχέση με τον ανωτέρω πίνακα, μίγμα ήπια (μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μια άκρη σιφωνίων που εισάγει στο σιφώνιο ήπια μπορείτε επίσης να αναμίξετε σε ένα vortexer και να υποβάλετε σε φυγοκέντρωση εν συντομία για να συλλέξετε το υγρό που διασκορπίζεται στον τοίχο ή το σωλήνα ΚΑΠ σωλήνων, και να τοποθετήσετε στο παγοκιβώτιο για μελλοντική χρήση).

2. Αναφερθείτε στις τοποθετήσεις προγράμματος αντίδρασης RT -RT-qPCR (πίνακας 2) για να θέσετε τη θερμοκρασία και το χρόνο της αντίδρασης.

Σημείωση: Προκειμένου να εξασφαλιστεί η δραστηριότητα 2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR και να βελτιωθεί η αποδοτικότητα ενίσχυσής του, είναι καλύτερο να προετοιμαστεί το σύστημα αντίδρασης RT -RT-qPCR μετά από την καθιέρωση το PCR πρόγραμμα οργάνων, έτσι ώστε το πρόγραμμα αντίδρασης μπορεί να εισαχθεί αμέσως αφότου ολοκληρώνεται η προετοιμασία συστημάτων.

3. Προκειμένου να αποκτηθεί η καλύτερη επίδραση qPCR, PCR κλίσης μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να βελτιστοποιήσει τους όρους αντίδρασης για τα διαφορετικά πρότυπα και τους διαφορετικούς εγχυτήρες.

Σημείωση: Η σειρά θερμοκρασίας επέκτασης της πολυμεράσης DNA Foregene Hotstar Taq που παρέχεται σε αυτήν την εξάρτηση είναι: 60-72℃, και η καλύτερη θερμοκρασία επέκτασης είναι 72℃.

Ο ακόλουθος είναι ένα παράδειγμα των όρων αντίδρασης RT -RT-qPCR. Συστήνεται να χρησιμοποιηθεί μια σε δύο στάδια μέθοδος για PCR την αντίδραση. Όταν η συγκέντρωση προτύπων είναι πάρα πολύ χαμηλή για να προκαλέσει τη μη συγκεκριμένη ενίσχυση, η χαμηλή αξία του TM εγχυτήρων οδηγεί στη χαμηλή αποδοτικότητα ενίσχυσης ή η φτωχή επανάληψη καμπυλών ενίσχυσης, κ.λπ., αυτό συστήνεται για να δοκιμάσει τη σε τρία στάδια μέθοδο για PCR την αντίδραση. Αναφερθείτε στον πίνακα 2-1 (σε δύο στάδια μέθοδος) και παρουσιάστε 2-2 (σε τρία στάδια μέθοδος) για τον καθορισμό των όρων αντίδρασης RT -RT-qPCR.

Μορφή 2-1: Ρύθμιση προγράμματος αντίδρασης RT -RT-qPCR (σε δύο στάδια)

Μορφή 2-2: Ρύθμιση προγράμματος αντίδρασης RT -RT-qPCR (σε τρία στάδια)

1*: Ο αντίστροφος χρόνος μεταγραφής μπορεί να ρυθμιστεί σύμφωνα με τις πειραματικές ανάγκες. Τα γενικά ενδογενή γονίδια όπως το β-ακτίνιο χρειάζονται μόνο 10 λεπτά για να ανιχνεύσει τα συγκεκριμένα εκφρασμένα γονίδια, ο αντίστροφος χρόνος μεταγραφής μπορεί να παραταθεί κατάλληλα όπως απαιτείται.

2*: Θέστε έναν συγκεκριμένο χρόνο σύμφωνα με το μήκος του ενισχυμένου τεμαχίου στόχων. Η ταχύτητα ενίσχυσης της πολυμεράσης DNA Foregene HotStar Taq είναι 2kb/min.

Σημείωση: PCR οι όροι αντίδρασης ποικίλλουν ανάλογα με τους δομικούς όρους του προτύπου, των εγχυτήρων, κ.λπ. Για τα πρότυπα RNA με τις σύνθετες δευτεροβάθμιες δομές, συστήνεται να χρησιμοποιηθεί 42℃ για το πρώτο βήμα της αντίστροφης μεταγραφής. Στη συγκεκριμένη λειτουργία, είναι απαραίτητο να σχεδιαστούν οι βέλτιστοι όροι αντίδρασης σύμφωνα με τους συγκεκριμένους όρους όπως το μέγεθος του τεμαχίου στόχων, η ακολουθία βάσεων του ενισχυμένου τεμαχίου και του περιεχομένου ΑΕΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ και του μήκους του εγχυτήρα, συμπεριλαμβανομένης της ανοπτώντας θερμοκρασίας, του χρόνου επέκτασης, κ.λπ.

Διάγραμμα λειτουργίας

Προφυλάξεις: (Παρακαλώ διαβασμένος τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

- Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφύγουν το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω, διαφορετικά η απόδοση των αντιδραστηρίων θα μειωθεί ή θα γίνει άκυρη.

- Τα αντιδραστήρια στην εξάρτηση πρέπει να προστατευθούν από ελαφρύ και να αποθηκευτούν σε -20°C.

- Συστήνεται να χρησιμοποιηθεί η φρέσκια εξαγωγή δειγμάτων ή το RNA προτύπων που αποθηκεύεται σε -80°C (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

- Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, παρακαλώ εκτελέστε το πείραμα στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και γάντια και μάσκες ένδυσης μίας χρήσης.

- Αυτή η εξάρτηση πρέπει να χρησιμοποιηθεί με τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για τα πειράματα. Παρακαλώ επιλέξτε τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για το γονίδιο που ενισχύεται σύμφωνα με τις ανάγκες του πειράματος.

- Πριν τη χρήση, βάλτε 2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR Ι στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και να αυξήσει PCR την ενίσχυση η ιδιομορφία.

- 2×RT-qPCR EasyTM μίγμα-SYBR περιέχει SYBR πράσινο Ι, παρακαλώ αποφύγετε το ισχυρό φως.