Rt-pcr EasyTM ΙΙ το σε δύο στάδια Cat.No.RT - 02021/02022 σε δύο στάδια RT PCR κύριες PCR μιγμάτων εξαρτήσεις

Rt-pcr EasyTM ΙΙ (το σε δύο στάδια) Cat.No.RT - 02021/02022 σε δύο στάδια κύριες PCR μιγμάτων rt-pcr εξαρτήσεις

Rt-pcr EasyTM ΙΙ (σε δύο στάδια)

Το Cat.No.RT - 02021/02022

Σε δύο στάδια κύριο μίγμα rt-pcr

Rt-pcr EasyTM ΙΙ (σε δύο στάδια)

Το Cat.No.RT - 02021/02022

Σε δύο στάδια κύριο μίγμα rt-pcr

Για την ερευνητική χρήση μόνο

Κατάστημα σε -20℃

Εισαγωγή προϊόντων

Το rt-pcr EasyTM ΙΙ (σε δύο στάδια) περιέχει όλα τα αντιδραστήρια για το σε δύο στάδια rt-pcr, που συνδυάζει RT την αντίδραση και PCR την αντίδραση στην ίδια εξάρτηση, που παρέχει το βελτιστοποιημένο RT μίγμα και PCR το μίγμα. Το μοναδικό RT μίγμα μπορεί να συνθέσει το υψηλής ποιότητας πρώτος-σκέλος cDNA εύκολα και αποτελεσματικά. 2× PCR EasyTM το μίγμα συν έχει την υψηλής απόδοσης και συγκεκριμένη ενίσχυση. Ο οργανικός συνδυασμός των δύο καθιστά την ανίχνευση του γονιδίου στόχων πιό ευαίσθητη.

Χαρακτηριστικά γνωρίσματα

Η σε πραγματικό χρόνο ποσοτική ανάλυση του RNA μπορεί να πραγματοποιηθεί γρήγορα και ακριβώς.

Η εξάρτηση χρησιμοποιεί ένα μοναδικό αντιδραστήριο μεταγραφής Foregene αντίστροφο και την πολυμεράση DNA Foregene HotStar Taq που συνδυάζονται με ένα μοναδικό σύστημα αντίδρασης για να βελτιώσει αποτελεσματικά την αποδοτικότητα ενίσχυσης και την ιδιομορφία της αντίδρασης.

Το βελτιστοποιημένο σύστημα αντίδρασης κάνει την αντίδραση να έχει την υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης, την ισχυρότερη θερμική σταθερότητα, και την καλύτερη ανοχή.

Περιεχόμενο εξαρτήσεων

Όροι μεταφορών και αποθήκευσης

1. Όροι μεταφορών

Ολόκληρη η διαδικασία της χαμηλής θερμοκρασίας μεταφοράς παγοκιβωτίων, ώστε να εξασφαλιστεί ότι η εξάρτηση είναι σε ένα κράτος <4>

2. Όροι αποθήκευσης

Αποθηκευμένος στο κατάστημα -20°C. το προϊόν σε ένα σταθερό ψυγείο θερμοκρασίας σε -20°C αμέσως μετά από την παραλαβή. Εάν οι όροι αποθήκευσης είναι κατάλληλοι, το προϊόν δεν θα υποβιβάσει οποιαδήποτε απόδοση κατά τη διάρκεια της ενός έτους περιόδου ισχύος.

Πληροφορίες τμημάτων εξαρτήσεων

2× RT EasyTM μίγμα: Foregene αντίστροφο Transcriptase, RNase ανασταλτικός παράγοντας, dNTPs, απομονωτής αντίδρασης, optimizer και σταθεροποιητής, κ.λπ.

2× PCR EasyTM μίγμα συν: Πολυμεράση DNA Taq Foregene, dNTPs, Mg2+, απομονωτής αντίδρασης, optimizer και σταθεροποιητής.

Προφυλάξεις: (Παρακαλώ διαβασμένος τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφύγουν το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω, διαφορετικά η απόδοση των αντιδραστηρίων θα μειωθεί ή θα γίνει άκυρη.

Για τα πρότυπα, συστήνεται να χρησιμοποιηθεί το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα ή που αποθηκεύεται σε -80℃ (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, η λειτουργία πειράματος πρέπει να διενεργηθεί στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες φυγοκεντρωτών χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και τα μίας χρήσης γάντια και οι μάσκες πρέπει να φορεθούν.

Αυτή η εξάρτηση πρέπει να χρησιμοποιηθεί με τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για τα πειράματα. Παρακαλώ επιλέξτε τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για το γονίδιο που ενισχύεται σύμφωνα με τις ανάγκες του πειράματος.

Πριν τη χρήση, βάλτε το μίγμα 2×RT EasyTM και το μίγμα 2×PCR EasyTM συν στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και να βελτιώσει την ιδιομορφία PCR της ενίσχυσης.

Προφυλάξεις: (Παρακαλώ διαβασμένος τις προφυλάξεις προσεκτικά πρίν χρησιμοποιεί την εξάρτηση)

- Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφύγουν το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω, διαφορετικά η απόδοση των αντιδραστηρίων θα μειωθεί ή θα γίνει άκυρη.

- Για τα πρότυπα, συστήνεται να χρησιμοποιηθεί το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα ή που αποθηκεύεται σε -80℃ (το RNA πρέπει να αποφύγει το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω).

- Προκειμένου να αποφευχθεί RNase η μόλυνση, η λειτουργία πειράματος πρέπει να διενεργηθεί στο RNase-ελεύθερο διάστημα οι άκρες σιφωνίων και PCR οι σωλήνες φυγοκεντρωτών χρησιμοποιούμενοι πρέπει να είναι RNase-ελεύθεροι και τα μίας χρήσης γάντια και οι μάσκες πρέπει να φορεθούν.

- Αυτή η εξάρτηση πρέπει να χρησιμοποιηθεί με τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για τα πειράματα. Παρακαλώ επιλέξτε τους συγκεκριμένους εγχυτήρες για το γονίδιο που ενισχύεται σύμφωνα με τις ανάγκες του πειράματος.

- Πριν τη χρήση, βάλτε το μίγμα 2×RT EasyTM και το μίγμα 2×PCR EasyTM συν στον πάγο για να λειώσετε εντελώς, να τινάσει και να αναμίξετε καλά πριν τη χρήση η προετοιμασία του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιηθεί σε ένα λουτρό πάγου για να βελτιώσει την απόδοση της εξάρτησης και να βελτιώσει την ιδιομορφία PCR της ενίσχυσης.

Συγκέντρωση RNA προτύπων

Rt-pcr EasyTM ΙΙ (σε δύο στάδια): (συνολικό RNA 0.1pg-5μg)/σύστημα 20μl

Οδηγός λειτουργίας

Α-1: Προετοιμασία των υλικών και των αντιδραστηρίων

1. Προετοιμάστε το έτοιμο πρότυπο RNA (συστήνεται να χρησιμοποιηθούν οι συνολικές εξαρτήσεις σειράς εξαρτήσεων απομόνωσης RNA Foregene για να εξαγάγει και να καθαρίσει το RNA), τους συγκεκριμένους εγχυτήρες (10μM) και τα σχετικά αναλώσιμα και τα όργανα.

Σημείωση: Παρακαλώ εξασφαλίστε την ακεραιότητα του RNA και προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε το RNA που εξάγεται από τα φρέσκα δείγματα.

2. Τεθειμένο μίγμα 2×RT EasyTM και RNase-ελεύθερο ddH2O σε ένα λουτρό πάγου για να το αφήσει να λειώσει φυσικά, και να τινάσει τον τοίχο σωλήνων που αναμιγνύει καλά για μελλοντική χρήση.

Α-2: RT προετοιμασία συστημάτων

2× RT EasyTM το μίγμα είναι κατάλληλο και γρήγορο να χρησιμοποιήσει, αποφεύγοντας τη ρύπανση κατά τη λειτουργία και τα πειραματικά λάθη που προκαλούνται από τις πολλαπλάσιες προετοιμασίες του συστήματος αντίδρασης στο μέγιστο βαθμό. Κατά τη χρησιμοποίηση, πάρτε ακριβώς το μισό όγκο του συστήματος αντίδρασης (παραδείγματος χάριν, εάν το σύστημα αντίδρασης είναι 20μl, πάρτε τη λύση μιγμάτων 10μl 2×RT EasyTM), προσθέστε το πρότυπο RNA και τους αντίστροφους εγχυτήρες μεταγραφής, και προσθέστε RNase-ελεύθερο ddH2O για να αποτελέσετε τον όγκο σε 20μl. Η συγκεκριμένη RT προετοιμασία συστημάτων αντίδρασης μπορεί να αναφερθεί στον πίνακα 1 κατωτέρω.

Μορφή 1: RT προετοιμασία συστημάτων

Α-3: RT ρύθμιση προγράμματος αντίδρασης

1. Μετά από να προετοιμάσει το RT σύστημα σε σχέση με τον ανωτέρω πίνακα, μίγμα ήπια (μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μια άκρη σιφωνίων για να φυσήξετε ήπια μπορείτε επίσης να το αναμίξετε στο vortexer και να το υποβάλετε σε φυγοκέντρωση για να συλλέξετε το υγρό που διασκορπίζεται στον τοίχο ή το σωλήνα ΚΑΠ σωλήνων, και να το τοποθετήσετε σε έτοιμο να χρησιμοποιήσετε στο παγοκιβώτιο).

2. Αναφερθείτε στις RT τοποθετήσεις προγράμματος αντίδρασης (πίνακας 2) για να θέσετε τη θερμοκρασία αντίδρασης, το χρόνο, κ.λπ.

Σημείωση: Προκειμένου να εξασφαλιστεί η δραστηριότητα του μίγματος και να βελτιωθεί η αποδοτικότητα ενίσχυσής του, είναι καλύτερο να προετοιμαστεί το RT σύστημα αντίδρασης αφότου φθάνει το λουτρό μετάλλων στην καθορισμένη θερμοκρασία αντίδρασης (αντίστροφη θερμοκρασία 42℃ ή 50℃ μεταγραφής), έτσι ώστε το σύστημα μπορεί να προετοιμαστεί αμέσως μετά από την ολοκλήρωση της προετοιμασίας συστημάτων. Εισάγετε το πρόγραμμα αντίδρασης. Η RT αντίδραση μπορεί επίσης να εκτελεσθεί σε μια PCR μηχανή.

Μορφή 2: RT ρύθμιση προγράμματος αντίδρασης

Σημείωση: Κατά χρησιμοποίηση του τυχαίου εγχυτήρα, την αντίδραση πρέπει να προθερμανθεί σε 25℃ για 10min πριν από το πρώτο βήμα της αντίδρασης. Η ανωτέρω διαδικασία είναι για την αναφορά μόνο. Οι πραγματικές συνθήκες αντίδρασης ποικίλλουν ανάλογα με τους δομικούς όρους του προτύπου, των εγχυτήρων, κ.λπ. Για τα πρότυπα RNA με τα σύνθετα δευτεροβάθμια αποτελέσματα, η πρώτη θερμοκρασία αντίδρασης συστήνεται για να είναι 50℃.

1. Το προϊόν αντίδρασης μπορεί να χρησιμοποιηθεί άμεσα στις επόμενες δοκιμές, ή να αποθηκευτεί σε -20°C μέχρι και μια εβδομάδα. Για τη μακροπρόθεσμη αποθήκευση, συστήνεται να αποφευχθεί το επαναλαμβανόμενο πάγωμα και το ξεπαγώνω σε -80°C.

Β: PCR αντίδραση προσδιορισμού

Β-1: PCR προετοιμασία συστημάτων αντίδρασης

Χρησιμοποιήστε το cDNA που συντίθεται στο βήμα Α ως πρότυπο, και εκτελέστε τη PCR αντίδραση με το μίγμα 2×PCR EasyTM συν παρεχόμενος στην εξάρτηση. Τοποθετήστε το μίγμα 2×PCR EasyTM συν, cDNA, και RNase-ελεύθερο ddH2O σε ένα λουτρό πάγου για να το αφήσετε να λειώσει φυσικά, και να τινάσει τον τοίχο σωλήνων που αναμιγνύει μέχρι τη χρήση. Για τη συγκεκριμένη PCR προετοιμασία συστημάτων, αναφερθείτε στον πίνακα 3 κατωτέρω.

Μορφή 3: PCR προετοιμασία συστημάτων αντίδρασης 反应体系配制

1*: Συνήθως η τελική συγκέντρωση του εγχυτήρα είναι 0.20.25μM για να πάρει τα καλύτερα αποτελέσματα. Όταν η απόδοση αντίδρασης είναι κακή, η συγκέντρωση εγχυτήρων μπορεί να ρυθμιστεί μέσα στη σειρά 0.10.5μM.

Β-2: PCR ρύθμιση όρου αντίδρασης

1. Μετά από να προετοιμάσει το PCR σύστημα σε σχέση με τον ανωτέρω πίνακα, μίγμα ήπια (μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μια άκρη σιφωνίων για να φυσήξετε ήπια μπορείτε επίσης να το αναμίξετε στο vortexer και να το υποβάλετε σε φυγοκέντρωση για να συλλέξετε το υγρό που διασκορπίζεται στον τοίχο ή το σωλήνα ΚΑΠ σωλήνων, και να το τοποθετήσετε σε έτοιμο να χρησιμοποιήσετε στο παγοκιβώτιο).

2. Αναφερθείτε στις PCR τοποθετήσεις προγράμματος αντίδρασης (πίνακας 4) για να θέσετε τη θερμοκρασία και το χρόνο της αντίδρασης.

Σημείωση: Προκειμένου να εξασφαλιστεί η δραστηριότητα του PCR μίγματος και να βελτιωθεί η αποδοτικότητα ενίσχυσής του, είναι καλύτερο να τεθούν οι PCR όροι στη PCR μηχανή πρίν προετοιμάζει το PCR σύστημα.

Μορφή 4: PCR ρύθμιση όρου αντίδρασης

1*: Θέστε έναν συγκεκριμένο χρόνο σύμφωνα με το μήκος του ενισχυμένου τεμαχίου στόχων. Η ταχύτητα ενίσχυσης της πολυμεράσης DNA Foregene Taq είναι 2kb/min.

Σημείωση: PCR οι όροι αντίδρασης ποικίλλουν ανάλογα με τους δομικούς όρους του προτύπου, των εγχυτήρων, κ.λπ. Για τα πρότυπα RNA με τις σύνθετες δευτεροβάθμιες δομές, συνιστάται η θερμοκρασία αντίδρασης για το πρώτο βήμα της αντίστροφης μεταγραφής να είναι 50°C. Σε συγκεκριμένες διαδικασίες, είναι απαραίτητο να σχεδιαστούν οι βέλτιστοι όροι αντίδρασης, συμπεριλαμβανομένης της ανοπτώντας θερμοκρασίας, του χρόνου επέκτασης, κ.λπ., σύμφωνα με τους συγκεκριμένους όρους όπως το μέγεθος του τεμαχίου στόχων, η ακολουθία βάσεων του ενισχυμένου τεμαχίου, και του περιεχομένου ΑΈΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ και του μήκους του εγχυτήρα.

Rt-pcr διάγραμμα λειτουργίας