ΠΩΣ ΝΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗΝ ΑΠΟΔΟΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΑΝΤΊΣΤΡΟΦΗΣ ΜΕΤΑΓΡΑΦΉΣ LNCRNA;

Μόλυβδος

Το μακρύ RNA μη-κωδικοποίησης, lncRNA είναι ένα RNA μη-κωδικοποίησης με ένα μήκος μεγαλύτερο από 200 νουκλεοτίδες, γενικά μεταξύ του nt 200-100000. lncRNA ρυθμίζει την έκφραση γονιδίων epigenetic, τη μεταγραφή και τα μετα-μεταγραφικά επίπεδα, και συμμετέχει να κατασιγάσει χρωμοσωμάτων Χ, την αποτύπωση γονιδιώματος και την τροποποίηση χρωματίνης, ενεργοποίηση μεταγραφής, παρέμβαση μεταγραφής, πυρηνική μεταφορά, κανονισμός κύκλων κυττάρων, κανονισμός διαφοροποίησης κυττάρων, και αποτελέσματα αποζημιώσεων δόσεων (επίδραση αποζημιώσεων δόσης) και πολλές άλλες σημαντικές διαδικασίες κανονισμού είναι στενά συνδεδεμένες στο περιστατικό, την ανάπτυξη και την πρόληψη των ανθρώπινων ασθενειών, και είναι αυτήν την περίοδο ένα από τα καυτά σημεία στον τομέα της βιοιατρικής.

01 τύποι και χαρακτηριστικά LncRNA

lncRNA διαιρείται σε πολλούς τύπους σύμφωνα με τις διαφορετικές πηγές σχηματισμού του, όπως φαίνεται στον αριθμό ανωτέρω. Έχει τα ακόλουθα χαρακτηριστικά:

1. lncRNAs είναι συνήθως μακρύτερος, με τη δυναμική έκφραση και τις διαφορετικές να συνδέσει μεθόδους κατά τη διάρκεια της διαφοροποίησης
2. Έναντι της κωδικοποίησης τα γονίδια, lncRNA συνήθως έχουν ένα χαμηλότερο επίπεδο έκφρασης
3. Οι περισσότεροι lncRNAs έχουν την προφανή χρονική και χωρική ιδιομορφία έκφρασης στο στάδιο της διαφοροποίησης και της ανάπτυξης ιστού
4. Υπάρχουν χαρακτηριστικές εκφράσεις στους όγκους και άλλες ασθένειες
5. Οι υπομοριακές θέσεις του lncRNA είναι διαφορετικές
6. Η ακολουθία είναι χαμηλή στη συντήρηση, αλλά η λειτουργία έχει έναν ορισμένο βαθμό συντήρησης, κ.λπ.

02 συχνά ερωτήσεις για την αντίστροφη μεταγραφή LncRNA

Λόγω του χαμηλού περιεχομένου του lncRNA στα κύτταρα, το μακροχρόνιο μήκος και την υψηλού επιπέδου δομή, τέτοιο RNA έχει συχνά τις σύνθετες δομές όπως οι βρόχοι ή hairpins μίσχων, και το RT -RT-qPCR είναι επιρρεπή σε προβλήματα της ανεπιτυχούς αντίστροφης μεταγραφής ή της χαμηλής αποδοτικότητας.

Αντίστροφη λύση μεταγραφής 03 LncRNA

Στον κεντρικό κανόνα, η διαδικασία των ιών RNA που χρησιμοποιούν το αντίστροφο transcriptase τους για να συνθέσει το DNA που χρησιμοποιεί το RNA ως πρότυπο καλείται αντίστροφη μεταγραφή. Η διαδικασία το αντίστροφο transcriptase ιών RNA για να συνθέσει cDNA το πρότυπο τεχνητό καλείται αντίστροφη μεταγραφή. Τα κύρια στοιχεία που περιλαμβάνονται στο αντίστροφο σύστημα μεταγραφής: Πρότυπο RNA, αντίστροφο transcriptase, εγχυτήρες και άλλα συστατικά.

1.RNA πρότυπο

Η επιρροή του προτύπου RNA στην αντίστροφη μεταγραφή απεικονίζεται στη δομή, την αγνότητα και την ακεραιότητά της. Όσο υψηλότερη η αγνότητα και η ακεραιότητα του αποσπασματικού RNA, τόσο υψηλότερη η αποδοτικότητα της αντίστροφης μεταγραφής και τόσο ακριβέστερου τα επόμενα ποσοτικά αποτελέσματα. Το RNA που καθαρίζεται από τα συνήθως χρησιμοποιημένα αντιδραστήρια εξαγωγής RNA περιέχει συχνά τα υπολείμματα αλάτων οινοπνεύματος και guanidine, τα οποία έχουν μια ισχυρή ανασταλτική επίδραση στο περισσότερο αντίστροφο transcriptase.

transcriptase 2.Reverse

Το αντίστροφο transcriptase έχει μια βασική επιρροή το σε ολόκληρο αντίστροφο σύστημα μεταγραφής. Η κατάλληλη θερμοκρασία για το αντίστροφο transcriptase που χρησιμοποιείται στα περισσότερα εργαστήρια είναι γενικά 42°C. Στην πραγματικότητα, το άνοιγμα της υψηλού επιπέδου δομής RNA απαιτεί μια υψηλότερη θερμοκρασία, και οι απαιτήσεις για το αντίστροφο transcriptase είναι υψηλότερες.

3.Primer

Οι αντίστροφοι εγχυτήρες μεταγραφής περιλαμβάνουν τους γονίδιο-συγκεκριμένους εγχυτήρες, τους τυχαίους εγχυτήρες και τους οληγο εγχυτήρες της DT. Οι περισσότεροι lncRNAs δεν περιέχουν polyA τις ουρές, και είναι σημαντικό κατάλληλα να ταιριαχτούν με οι τυχαίοι εγχυτήρες την οληγο DT.

4.Other συστατικά

Λαμβάνοντας υπόψη ότι το RNA είναι ιδιαίτερα εύκολο να υποβιβαστεί, η εισαγωγή των συστατικών στο αντίστροφο σύστημα μεταγραφής μπορεί να ελαχιστοποιηθεί, το οποίο μπορεί αποτελεσματικά να αποτρέψει την είσοδο RNase και να εξασφαλίσει την ομαλή πρόοδο της αντίστροφης μεταγραφής.

Το Foregene λαμβάνει από το πρότυπο RNA, αντίστροφη μεταγραφή στη συνοδεία qPCR περιεκτικά η ανίχνευση lncRNA σας

Ζωική συνολική εξάρτηση απομόνωσης RNA (με τη στήλη αφαίρεσης gDNA)

Συνολική εξάρτηση απομόνωσης RNA κυττάρων (με τη στήλη αφαίρεσης gDNA)

Lnc-RT HeroTM Ι (με το gDNase) (έξοχη πρόμιξη για τη σύνθεση πρώτος-σκελών cDNA από το lncRNA)

Πραγματικός - χρονικό PCR easyTM-SYBR πράσινο Ι

Πλεονεκτήματα της εξαγωγής RNA:

Η εξάρτηση χρησιμοποιεί την τεχνολογία εξαγωγής RNA τρίτης γενιάς, καμία ανάγκη να χρησιμοποιηθεί DNase.

11 λεπτά από 96, 24, 12, και 6 καλά καλύπτουν τα καλλιεργημένα κύτταρα, υψηλής απόδοσης εξαγωγή του gDNA-ελεύθερου, high-purity, υψηλής ποιότητας συνολικού RNA κυττάρων.

Τα πλεονεκτήματα του lncRNA αντιστρέφουν τη μεταγραφή:

Ένα αντίστροφο σύστημα μεταγραφής αναπτύχθηκε ειδικά για LncRNA για να αφαιρέσει γρήγορα τη genomic μόλυνση DNA.

Το αντίστροφο σύστημα μεταγραφής έχει την υψηλή θερμική σταθερότητα και έχει ακόμα την καλή αντίστροφη εκτέλεση μεταγραφής σε 50°C.

Τα πρότυπα με την υψηλή ικανοποιημένη και σύνθετη δευτεροβάθμια δομή ΑΕΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ μπορούν να αντιστραφούν με την υψηλή αποδοτικότητα.

Πλεονεκτήματα του qPCR:

Η καυτή πολυμεράση Foregene Taq έναρξης έχει την υψηλότερη αποδοτικότητα ενίσχυσης, την υψηλότερη ευαισθησία ενίσχυσης, και την υψηλότερη ιδιομορφία ενίσχυσης.

Το βελτιστοποιημένο πραγματικό PCR εύκολο μίγμα καθιστά SYBR πράσινο εγώ έχει την υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης, και η ένταση φθορισμού της είναι 3-5 φορές αυτό των παρόμοιων προϊόντων, τα οποία μπορούν να ικανοποιήσουν τις ανάγκες των διαφορετικών τύπων ποσοτικών πειραμάτων φθορισμού.