Το ένζυμο Taq καυτός-έναρξης χρησιμοποιείται ευρέως. Έναντι της συνηθισμένης πολυμεράσης DNA, το ένζυμο Taq καυτός-έναρξης μπορεί αποτελεσματικά να αποφύγει κάποια μη συγκεκριμένη ενίσχυση και το σχηματισμό dimers εγχυτήρων, και μπορεί αποτελεσματικά να βελτιώσει το ποσοστό επιτυχίας της ενίσχυσης γονιδίων στόχων. Ειδικά στον τομέα της γενετικής δοκιμής, το ένζυμο Taq καυτός-έναρξης έχει προσδιοριστεί ως υποχρεωτικά πρότυπα στη βιομηχανία, και η συνηθισμένη πολυμεράση DNA δεν πρέπει να χρησιμοποιηθεί. Όπως μπορεί να δει από τα ανωτέρω, τα ένζυμα Taq καυτός-έναρξης χρησιμοποιούνται ευρέως. Αυτή τη στιγμή, υπάρχουν πολλά εμπορικά σήματα των ενζύμων Taq καυτός-έναρξης στην εγχώρια αγορά, αλλά δεν υπάρχουν πολλά ένζυμα Taq καυτός-έναρξης με υψηλό - ποιότητα. Αντιμέτωποι με τόσα πολλά ενζυμικά προϊόντα Taq καυτός-έναρξης, πώς θα έπρεπε να επιλέξουμε;
1. Επιλέξτε το ένζυμο Taq καυτός-έναρξης με την υψηλή αποδοτικότητα ενίσχυσης
PCR η αποδοτικότητα ενίσχυσης είναι στενά συνδεδεμένη στην απόδοση του ενζύμου Taq. Αφότου βελτιστοποιείται ένα καλό σύστημα ενζυμικής αντίδρασης Taq, η αποδοτικότητα ενίσχυσης είναι επάνω από 95%, και η σειρά ενίσχυσης του αρχικού ποσού προτύπων είναι ευρεία. Η ικανοποιητική ενίσχυση μπορεί να ληφθεί όταν η περιεκτικότητα σε γονίδια στόχων είναι χαμηλή, και δεν είναι εύκολο να δηλητηριαστεί όταν το ποσό προτύπων είναι υψηλό, και η εκθετική περίοδος ενίσχυσης είναι μεγάλη. Για το ένζυμο Taq με τη φτωχή επίδοση, ακόμα κι αν το σύστημα αντίδρασης έχει βελτιστοποιηθεί για πολλές φορές, η αποδοτικότητα ενίσχυσης είναι ακόμα λιγότερο από 90%, η μορφή του «S» της καμπύλης ενίσχυσης δεν είναι προφανής, η κλίση είναι μικρή, και η καμπύλη είναι επίπεδη. Όταν το ποσό προτύπου είναι χαμηλό, δεν μπορεί να ενισχυθεί, και όταν το ποσό προτύπου είναι υψηλό, η επίδραση ενίσχυσης δεν είναι ιδανική. Επομένως, η επιλογή των πολυμεράσεων DNA με την υψηλή αποδοτικότητα ενίσχυσης είναι κρίσιμη για την επιτυχία PCR και qPCR.
2. Επιλέξτε το ένζυμο Taq καυτός-έναρξης με την ισχυρή ενζυμική δύναμη
Η ενζυματική δύναμη του ενζύμου Taq συσχετίζεται με την αποδοτικότητα ενίσχυσης. Γενικά, όσο ισχυρότερη η ενζυματική δύναμη του ενζύμου Taq καυτός-έναρξης, τόσο περισσότεη η εκθετική περίοδος αύξησης PCR ενίσχυσης, η τόσο πιό χαρακτηριστική “S-shaped” καμπύλη, όσο υψηλότερη η αξία σημάτων φθορισμού, και τόσο καταλληλότερο για την πολλαπλή PCR ανίχνευση. Οι πολυμεράσεις DNA εμπορικών σημάτων με την αδύνατη ενζυματική δύναμη μπορούν γενικά μόνο να υποστηρίξουν 2 αντιδράσεις plex. Κατά κάνοντας 3 αντιδράσεις plex, η καμπύλη ενίσχυσης είναι χαμηλή, η αξία σημάτων φθορισμού είναι χαμηλή, και δεν υπάρχει καμία χαρακτηριστική καμπύλη ενίσχυσης, έτσι τα αποτελέσματα είναι δύσκολο να κριθούν.
3. Επιλέξτε ένα ένζυμο Taq καυτός-έναρξης με την υψηλή ευαισθησία
Κατά γενική ομολογία, η πολυμεράση DNA έχει την υψηλή αποδοτικότητα ενίσχυσης και την υψηλή ευαισθησία, αλλά υπάρχουν επίσης ασυνέπειες. Εάν η αφθονία γονιδίων στόχων του δείγματος που ενισχύεται είναι χαμηλή, συστήνεται να εξεταστεί η ευαισθησία ενίσχυσης του ενζύμου Taq. Η πιό κοινή μέθοδος ανίχνευσης είναι να πραγματοποιήσει 10 φορές ή 5 πτυχών διάλυση κλίσης του τεμαχίου πλασμιδίων γονιδίων στόχων, να πραγματοποιηθεί PCR η ανίχνευση στη χαμηλότερη διάλυση, και να επιλεχτεί το ένζυμο Taq καυτός-έναρξης με την υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης.
Μπορεί να δει από τα ανωτέρω ότι οι ερευνητές πρέπει να επιλέξουν σύμφωνα με τις πειραματικούς απαιτήσεις και τους όρους χρηματοδότησής τους. Είναι καλύτερο να γίνει ένα πείραμα ενίσχυσης διαλύσεων κλίσης για να ανιχνεύσει την αποδοτικότητα ενίσχυσης και την ευαισθησία του ενζύμου Taq καυτός-έναρξης.
Ένα παράδειγμα της πολυμεράσης DNA Taq Foregene:
Πολυμεράση DNA Foreasy HS Taq
Περιγραφή
Η πολυμεράση DNA Foreasy HS Taq είναι μια πολυμεράση DNA που εκφράζεται στα βακτηρίδια εφαρμοσμένης μηχανικής Escherichia coli από την τεχνολογία επανασυνδυασμού γονιδίων. Το ένζυμο συνδυάζεται με μια μοναδική αντίδραση buffffer, που καθιστά το προϊόν ιδιαίτερα ανθεκτικό και συμβατό, και μπορεί άμεσα να χρησιμοποιήσει το δείγμα lysate (σύστημα λύσης Foregene) ως πρότυπο για τις αντιδράσεις ανίχνευσης.
Εφαρμογή
Ποιοτικό PCR και η ποσοτική PCR ανίχνευση τα πρότυπα και μη-τα πρότυπα.
Ποιοτικός έλεγχος
1. Καμία δραστηριότητα νουκλεάσης που ανιχνεύεται εξωγενής
2.PCR μέθοδος για να ανιχνεύσει το υπόλοιπο genomic DNA χωρίς οικοδεσπότη
3.It μπορεί effffectively να ενισχύσει τα γονίδια ενιαίος-αντιγράφων στο ανθρώπινο γονιδίωμα
4.Store στη θερμοκρασία δωματίου για μια εβδομάδα, noobvious αλλαγές δραστηριότητας
Το μήνυμά σας πρέπει να αποτελείται από 20-3.000 χαρακτήρες!
